细胞培养需在无尘空间进行
细胞培养室的常用设备
准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未**物品）、储品规（放置**过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、 PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（ -80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、 CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧****机、 4℃ 冰箱（放置 serum 和培养用液）。
实验培养室无菌操作的基本技术
无菌室的**：
1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用 3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者 0.5 ％过氧乙酸擦拭。
2.CO2 孵箱（培养箱）**：先用 3‰ 新洁尔灭擦拭，然后用 75 ％酒精擦拭或者 0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射。
3. 实验前**：打开紫外灯、三氧**机、空气净化器系统各 20-30 分钟 。
4. 实验后**：用 75 ％酒精（ 3‰ 新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
５．定期检测下列项目：钢瓶之CO 压力；CO2培养箱之CO２浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加**剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验人员的无菌准备：1. 肥皂洗手。 2. 穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3. 用 75 ％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：
1. 凡是带入超净工作台内的酒精、 PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75 ％酒精擦拭瓶子的外表面
2. 靠近酒精灯火焰操作。
3. 器皿使用前必须过火**
4. 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5. 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。
6. 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
细胞培养需在无尘空间进行：器械的清洗和**
新玻璃器皿的洗消：
1. 自来水刷洗，除去灰尘。
2. 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入 5 ％稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。
3. 刷洗、烘干： 12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
4. 泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾 120g ：浓硫酸 200ml ：蒸馏水 1000ml ）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗 15 次，*后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过 3 次。
5. 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
6. 高压**：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和**阀，当蒸气成直线上升时，关闭**阀，当指针指向 15 磅 时，维持 20-30 分。7. 高压**后烘干。
旧玻璃器皿的洗消：
1 ．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。
2. 泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液）， 12 小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗 3 次。
3. 烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于**储存及防止灰尘和再次被污染。
4. 高压**：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和**阀，随着温度的上升**阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出 3-5 分钟后，关闭**阀，气压表指数随之上升，当指针指向 15 磅 时，调节电开关维持 20-30 分钟即可。（玻璃培养瓶**前可将胶帽轻轻盖上）
5. 烘干备用：因为高压**后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。金属器械洗消：
金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用 75 ％酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内 15 磅 高压（ 30 分钟）**，再烘干备用。
橡胶和塑料制品的清洗和**：
橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸馏水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：
1 . 针式滤器帽不能泡酸液 , 用 NaOH 泡 6-12 小时 , 或者煮沸 20 分钟 , 在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上 ( 凹向上 ) ，然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内 15 磅 30 分钟**，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。
2. 胶塞烘干后用 2 ％氢氧化钠溶液煮沸 30 分钟（用过的胶塞只要用沸水处理 30 分钟），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液 30 分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。*后装入铝盒内高压**，烘干备用。
3. 胶帽，离心管帽烘干后只能在 2 ％氢氧化钠溶液中浸泡 6-12 小时（切记时间不能过长），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液 30 分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。*后装入铝盒内高压**，烘干备用。
4. 胶头可用 75 ％酒精浸泡 5 分钟，然后紫外照射后使用即可。
5. 塑料培养瓶，培养板，冻存管.
6. 其他**方法：有的物品既不能干燥**，又不能蒸气**，可用 70 ％酒精浸泡**。塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露在紫外线下**。也可用氧化乙烯**塑料制品，**后需要用 2—3 周时间洗除残留的氧化乙烯。用 20000—100000rad 的 r 射线**塑料制品效果*好。为了防止清洗器材已**与末**发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否**。密写墨水的配制：氯化钻 (CoC12·6H2o) 2g ，30％盐酸 10m 1，蒸馏水 88m1 。
细胞培养需在无尘空间进行注意事项：
1. 严格执行高压锅的操作规程：高压**时，先检查锅内是否有蒸馏水，以防高压时烧干，水不能过多因为其将使空气流畅受阻，会降低高压**效果。检查**阀是否通畅，以防高压时爆炸。
2. 安装滤膜时注意光面朝上：注意滤膜光滑一面是正面，要朝上，否则起不到过滤的作用。
3. 注意人体的防护和器皿的完全浸泡： A. 泡酸时要戴耐酸手套，防止酸液溅起伤害人体。 B. 从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面，会腐蚀地面。 C. 器皿浸入酸液中要完全，不能留有气泡，以防止泡酸不彻底。
细胞培养用液的配制与**：器材与试剂：干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素 . 纯净水系统、电子天平、 PH 计、磁力搅拌器。